注意:每次订单都需要填写完整个人信息:姓名,单位,邮箱,电话等。 邮箱建议使用163.com/126.com/188.com等邮箱,填写时请使用大写字母。 请尽量填写手机号,我们不会主动给您拨打手机,而是用来短信通知测序情况。
样品信息
- 确保您样品管上的编号和登记表上样品编号一致,以免使您的样品混淆。同时注意样品编号不要超过8个字节,并不能出现汉字及特殊字符等(仪器不识别);
- 必须确认单个样品反应数及样品反应总数,以免出现多测或漏测现象,造成疑问或不必要的纠纷;
- 需要测通或单向测通的可以在表上注明,我们可以直接安排测通,节约您的测序时间。但注意:注明测通的我们将直接安排实验,不再与您确认,所以有任何问题必须提前通知我们;
- 菌液和质粒测序一定要写明正确载体名称和引物名称,以便我们正确测序和核对您的测序疑问。
- 如果是我处没有的通用引物,请提供合适的引物测序。如您没有引物也可以提供电子版的载体图谱和序列(标明酶切位点和测序方向),我处可帮助设计引物后再安排测序。特别需要注意的是载体名称一定写全,以免用错引物。
如:只写T载体,而PGEM-T和PMD18-T这两种T载体的引物是不能共用。还有PMD18-T、PΜC18(118)、PΜC19(119)等系列载体测序引物不要写正向(+,M13+,M13F)或反向(-,M13-,M13R),要注明M13F(-47)或M13R(-48),因为这类载体较特别。
- 菌液测序请注意抗生素(我们备氨苄青霉素,卡那霉素)和培养基类型(我们备LB),如是我处没有的,请您提供5ML新鲜菌液或质粒测序;
- 有特殊结构的样品 (如:拷贝数低、GC rich、有poly结构、发夹结构、重复序列、复杂结构等)
一定要在表上注明。这样在安排实验时我们可以有针对的改变实验条件,提高这部分样品的成功率。
样品要求
菌样
- 需注明载体类型和抗性,我们常备Amp, Kan两种抗生素,其他抗性自备;
- 应为高拷贝质粒,对于低拷贝质粒(如pET载体等),请直接提供约3μg左右纯化质粒;
- 需培养的菌液:要求提供的量至少500μl过夜培养的菌液(培养时间必须在12小时以上),封口保存,防止交叉污染或渗漏;
- 若是特殊抗生素:请提供5ML菌液或质粒用于测序;
- 无需培养的菌液:要求提供的量至少为4ml已培养好的菌液;
- 大量样品测序:建议在96空板或者Eppendorf管中用牙签穿刺培养;
- 注意:关于噬菌体,我们绝对不收菌液,只收抽提好的质粒,请一定要注意;
质粒(除特殊样品,我们一般不建议客户提供质粒)
- 您自行抽提的质粒务必溶于20μl双蒸水中,电泳检测浓度大于100ng/μl浓度;
- 如有可能,同时提供1ml左右含有相应质粒的菌液备用;
- 若您要长期测序请您加大质粒的量,大质粒必需注明载体长度,拷贝数低也要注明;
- 必须写明载体名称,插入片段长度;
PCR已纯化
- 您自行纯化的PCR产物务必溶于双蒸水,浓度要求至少50ng/μl,量至少20μl以,浓度大于50ng/μl,并注明片段长度,长片段需适当增加量,便于核对样品测序是否有问题,同时方便安排需要测通的样品测序和拼接工作;
- 若您要长期测序请您加大PCR纯化产物的量;
- 您回收的PCR产物务必为单一条带,否则将无法测序或影响测序结果。
PCR未纯化
- PCR未纯化产物测序要求片断长度大于100BP小于2KB,如大于2KB最好建议您克隆后测序,浓度要求至少50ng/μl,量至少50μl,并注明片段长度,便于核对样品测序是否有问题,同时方便安排需要测通的样品测序和拼接工作;
- 建议您送PCR未纯化产物是电泳可见的单一明亮的特异性条带;
- 核对所送样品是否有渗漏现象,如有,建议您重新送样。
自备引物要求
- 引物必须经过PAGE纯化方可测序,浓度要求不低于5pmol/μl(或5μmol/L),体积大于
10μl(干粉也可,务必标明OD值);
- 请提供引物全序列、PCR退火温度,以供参考(引物长度18-22bp为宜),同时标明引物序列,以便帮助您更好地分析测序结果;
- 随机引物、标记引物和简并引物不能用于测序。
样品与引物的保存
您提供的样品没有特殊情况我们保留二个月,引物没有特殊情况我们保留一个月,超过期限将全部处理。如果您要用超过二个月的样品或一个月引物测序请您重新提供样品和引物。 |